Утверждаю

Главный государственныйсанитарный врач Российской

Федерации - Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г.Онищенко

22.03.2000 г.

 

Государственноесанитарно-эпидемиологическое нормирование

Российской Федерации

 

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИМИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

Санитарно-паразитологическоеисследование воды

хозяйственного ипитьевого использования

 

Методические указания

 

МУК 4.2.964-00

 

Дата введения: 1 июня2000 г.

 

 

1. Подготовленыколлективом авторов: Г.И.Новосильцев (к.м.н.), Н.А.Романенко (д.м.н., академикРАЕН), В.А.Рябченко (к.б.н.), Г.С.Горяинова, Т.А.Семенова (к.б.н.), М.Е.Батаева(к.м.н.), Ю.А.Рахманин (д.м.н., академик РАМН), Р.Э.Михайлова (д.м.н.) - ИМПиТМим. Е.И.Марциновского Минздрава России, НИИ КВОВ АКХ им. К.Д.Памфилова,НИИЭЧиГОС им. А.Н.Сысина РАМН. Использованы материалы, разработанныеН.А.Русановой (к.м.н.), Г.Л.Медришем (к.т.н.) - НИИ КВОВ АКХ им. К.Д.Памфилова.

 

2. Утверждены и введеныв действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 22марта 2000 г.

 

3. С введением настоящихметодических указаний утрачивают силу МУК 4.2.668-97"Санитарно-паразитологическое исследование воды" и раздел"Контроль качества питьевой воды по паразитологическому показателю (содержаниецист лямблий)", пункты 4, 5, 6 Информационно-методического письма "Одополнительных мерах по осуществлению контроля качества питьевой воды помикробиологическим и паразитологическим показателям" от 24 июля 1998 г. №1100/1670-98-11.

 

 

1. Назначение и областьприменения

 

1.1. Настоящиеметодические указания устанавливают метод лабораторного исследования качестваводы хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водопользования попаразитологическим показателям безопасности для здоровья человека, проводимогов порядке государственного санитарно-эпидемиологического надзора.

1.2. Методическиеуказания предназначены для применения в лабораториях учреждений, осуществляющихгосударственный санитарно-эпидемиологический надзор, а также ведомственныйлабораторный контроль качества окружающей среды на соответствие:

• СанПиН 2.1.4.559-96"Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованныхсистем питьевого водоснабжения. Контроль качества";

• СанПиН 2.1.2.568-96"Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству водыплавательных бассейнов";

• СанПиН 3.2.563-96"Профилактика паразитарных болезней на территории РоссийскойФедерации";

• действующим санитарнымправилам по охране поверхностных вод от загрязнения. 

 

2. Методикасанитарно-паразитологического исследования

воды хозяйственного ипитьевого использования

 

Методика предназначенадля обнаружения в воде цист патогенных простейших кишечника (лямблий, амебыдизентерийной, балантидия) и яиц гельминтов, представляющих непосредственнуюугрозу для здоровья человека при их заглатывании, при осуществлении контролякачества воды по паразитологическим показателям в источникаххозяйственно-питьевого водоснабжения (поверхностных водоемах, ручьях, каптажах,колодцах, артезианских скважинах), в распределительной сети системцентрализованного хозяйственно-питьевого водоснабжения, а также в водоемахрекреационного назначения <*>.

_______________

*⁾ Настоящая методика не предназначена дляиндикации в воде ооцист криптоспоридий, т.к. для их определения требуются болеесложная подготовка диагностического материала и использование дорогостоящихспециальных тест-систем, не выпускаемых в настоящее время отечественнымипроизводителями.

 

2.1. Принцип методики

 

Цисты патогенныхпростейших кишечника и яйца гельминтов обнаруживаются при микроскопическомисследовании осадка, получаемого после центрифугирования не менее 4-кратноразведенного раствора флотанта с плотностью 1,26, в который искомыепаразитарные агенты попадают из осадка, смываемого с мембранных фильтров послефильтрации через них исследуемой воды. Осаждение цист простейших и яицгельминтов происходит за счет резкого снижения плотности флотанта, котораяпосле разведения достигает 1,03 и менее, что ниже плотности паразитарныхагентов. Плотность их приводится в разделе 7.

 

2.2. Чувствительностьметода

 

Метод обладаетчувствительностью с пределом обнаружения, равным единичным цистам лямблий на 1л. Эффективность выделения цист лямблии данным методом зависит от исходнойконцентрации паразитарных патогенов в пробе, объема пробы, мутности, обилияфитопланктона и квалификации исполнителя.

 

3. Оборудование иматериалы

 

3.1. Оборудование

 

3.1.1 .Устройство длявакуумной фильтрации через мембранные фильтры: стационарное устройство,используемое для бактериологических и химических исследований в лабораторияхводоочистных станций и центров госсанэпиднадзора: фильтровальный аппарат АФ или"Прибор вакуумного фильтрования" ПВФ-142/ЭМ. При отсутствии указанныхстационарных установок может быть использован аппарат Гольдмана, состоящий изворонки Гольдмана, колбы для фильтрования под вакуумом номинальной вместимостью2000 - 5000 мл (ГОСТ 6514-63), водоструйного насоса (ГОСТ 10696-75) или насосаКомовского, а в полевых условиях - ручного велосипедного насоса или другихустановок, прошедших гигиеническую оценку и имеющих гигиеническое заключение.

3.1.2.Мембранные фильтрыс порами размером 3 - 5 мк и диаметром мембранного диска, соответствующимразмерам фильтровальной ячейки фильтрующего устройства, - от 35 ± 2 мм и более.В качестве мембранных фильтров могут быть применены фильтрующие мембраны"Владипор" марки МФАС-СПА ТУ 6-55-221-15-18-98 (предназначены дляиспользования в приборе ПВФ142/ЭМ), "Миллипор", "Прагопор","Сарториус" или другие с аналогичными свойствами, прошедшиегигиеническую оценку и имеющие гигиеническое заключение.

3.1.3. Лабораторнаяцентрифуга типа ОПН-3, ОПН-8, ЦЛС-31М со сменным ротором или другие саналогичными параметрами, обеспечивающие 1500 - 2500 об/мин (600 - 650g),позволяющие центрифугировать пробы воды в центрифужных пробирках объемом 10 -250 мл.

3.1.4. Холодильникэлектрический или газовый, поддерживающий температуру 4 - 6°С.

3.1.5. Термостатэлектрический типа ТС-80 или аналогичный с автоматическим терморегулятором итермометром с ценой деления 0,2°С.

3.1.6. Микроскопбиологический (типа МБИ, "Биолам" и др.), снабженный бинокулярнойнасадкой (АУ-12 и др.), препаратоводителем (типа СТ-12 и др.), имеющийобъективы 10, 20, 40 и объектив 90 - 100х масляной иммерсии, а также желательнообъектив 40 - 65х водной иммерсии, обеспечивающий увеличение от 100 до 1000крат, имеющий объектив и укомплектованный окуляр-микрометром иобъект-микрометром для калибровки первого, а также имеющий оптику фазовогоконтраста, расширяющую возможности дифференциации цист от фитопланктона.

3.1.7. Осветитель ОИ-19для микроскопа или другой аналогичный с мощностью лампы не менее 50 ватт.

3.1.8. Весы лабораторныедля взвешивания в диапазоне 50 мг - 200 г равноплечные ручные (аптекарские) сразновесами, ВЛР-200 и др.

3.1.9. Денсиметры(ареометры) типа 1 (А1) с пределами измерения от 1,000 до 1,400 кг/м3 ГОСТ1300-74.

3.1.10. Дозаторыпипеточные П1-0,1, П1-0,5, П1-1,0 мл ТУ 64-339-81 или аналогичные.

3.1.11. Пинцетанатомический.

3.1.12. Кисти мягкие изволоса белки, колонка или соболя для живописи №№ 12 - 18.

3.1.13. Стаканыстеклянные высокие с носиком (ВН) номинальной вместимостью 50 - 100 мл ГОСТ10394-63.

3.1.14. Пробиркицентрифужные градуированные (ПЦГ) емкостью 10 мл ГОСТ 1770-64.

3.1.15. Стеклапредметные 25 х 75 мм.

3.1.16. Стекла покровные18 х 18, 24 х 24 мм ГОСТ 6672-59.

3.1.17. Чашкибиологические (Петри) ГОСТ 25336-82.

3.1.18. Часы песочные на3 - 5 мин или часы сигнальные.

3.1.19. Штативылабораторные для пробирок ТУ 64-1-707-80.

3.1.20. Емкости дляотбора проб воды из нейтрального материала, пригодные для обеззараживанияпринятыми методами: канистры пластмассовые емкостью 5 - 10 - 20 - 25 л,стеклянные бутыли, фляги молочные металлические емкостью 30 - 35 л,эмалированные бидоны.

3.1.21. Цилиндрыизмерительные с носиком 1-100, 1-250, 1-500 ГОСТ 1770-74.

3.1.22. Колба 2-50-2,2-100-2, 1-1000 ГОСТ 1770-74.

3.1.23. Капельница длямногократной дозировки по Манну ГОСТ 9876-61.

3.1.24. Широкогорлыестеклянные или пластиковые флаконы емкостью 100 - 500 мл с притертым илизавинчивающимися крышками.

3.1.25. Спиртовка.

3.1.26. Иглыпрепаровальные.

3.1.27. Ножницы спрямыми браншами.

 

3.2. Реактивы

 

3.2.1. Формальдегид40%-ный (продажный).

3.2.2. Сульфат цинкасемиводный (ZnSO₄· 7H₂O)х.ч.

3.2.3. Сахароза ч.д.а.

3.2.4. Сульфат магния (MgSO₄) ч.д.а.

3.2.5. Тиосульфат натрияГОСТ 244-76.

3.2.6. Водадистиллированная ГОСТ 6709-72.

3.2.7. Натрий хлористыйх.ч. ГОСТ 4233-77.

3.2.8. Йодкристаллический х.ч.

3.2.9. Калий йодистый(KI) х.ч.

3.2.10. Эозин сухой х.ч.

3.2.11. Метиленовыйсиний сухой х.ч.

3.2.12. Кислотахлористоводородная (HCl) 30% х.ч.

3.2.13. Сульфат аммония [(NH₄)₂SO₄] х.ч.

3.2.14. Сульфат железа [Fe₂(SO₄)₃] х.ч.

3.2.15. Сульфат меди (CuSO₄) х.ч.

3.2.16. Панкреатинсухой.

3.2.17. Содадвууглекислая (Na₂CO₃).

 

3.3. Приготовлениерабочих растворов реактивов

 

3.3.1. Флотанты - любойиз трех ниже названных:

• 33%-ный водный растворсемиводного сульфата цинка: 331 г семиводного сульфата цинка растворяют в 1 дм3кипящей дистиллированной воды;

• 30%-ный водный растворсахарозы: 300 г сахарозы ч.д.а. растворяют в 1 дм3 горячей (70 - 80°С)дистиллированной воды;

• раствор, состоящий изсмеси насыщенных растворов сульфата магния (250 г соли растворяют в 1 л водыпри температуре 80°С), тиосульфата натрия (300 г соли растворяют в 1 л кипящейводы) и дистиллированной воды, соотношение компонентов 3:3:1.

После приготовленияфлотанта и снижения его температуры до 18°С контролируют его удельную плотностьареометром. Для выделения цист простейших и яиц гельминтов, представляющихнепосредственную опасность заражения человека при заглатывании с водой, удельнаяплотность флотанта должна быть 1,25 - 1,26. Если величина этого показателяниже, ее нужно откорректировать, добавляя более концентрированные растворысоответствующих веществ.

3.3.2. 3%-ный растворЛюголя: 1,5 г йода кристаллического и 3 г калия йодистого растворяют в 100 млдистиллированной воды (первым растворяют калий йодистый), выдерживают в темнотепри 37°С в течение 3 суток, после чего используют в работе.

3.3.3. 2%-ный водныйраствор формалина: 1 часть 40%-ного формальдегида растворяют в 20 частяхдистиллированной воды.

3.3.4. ЖидкостьБарбагалло: 3%-ный формалин на физиологическом растворе (0,85% хлорида натрия).

3.3.5. 1%-ный водныйраствор эозина.

3.3.6. Раствор,состоящий из 1 части метиленового синего и 50000 частей дистиллированной воды,готовят путем последовательных разведении.

3.3.7.Смесь(искусственный дуоденальный сок), состоящая из 0,5 г панкреатина, 0,9 гдвууглекислой соды и 5 мл дистиллированной воды.

3.3.8. Растворхлористоводородной кислоты 1%-ный.

 

4. Отбор и хранение проб

 

Отбор проб питьевой водыи воды плавательных бассейнов по количеству и кратности проводят в соответствиис СанПиН 2.1.4.559-96 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качествуводы централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества" иСанПиН 2.1.2.568-96 "Гигиенические требования к устройству, эксплуатации икачеству воды плавательных бассейнов".

Контроль воды подземныхводоисточников по паразитологическим показателям может быть рекомендован приусловии неоднократных неудовлетворительных микробиологических результатовисследования.

Количество проб и точекзабора в распределительной сети утверждается по согласованию ссанитарно-эпидемиологической службой при разработке рабочей программы с учетомчисленности водопотребителей.

Отбор проб водыпроизводится в чистые емкости. Сосуды больших объемов - молочные фляги,металлические и пластмассовые ведра и т.п., которые тщательно промываютсякипяченой водой и ополаскиваются отбираемой для анализа водой.

Пробы воды могутдоставляться в лабораторию без обработки или, в целях облегчения ихтранспортирования, после предварительной обработки (концентрирования материалапутем фильтрования на месте отбора проб, в лаборатории водопроводной станции идр.).

С этой же целью можетбыть использована методика первичной концентрации паразитарных патогенов спомощью таких коагулянтов, как сульфат аммония, сульфат железа, сульфат меди вдозе 0,1 - 0,3 г/л.

В пробу воды на местеотбора добавляют коагулянт, затем тщательно перемешивают и отстаивают 1 - 2 ч.После этого надосадочную жидкость удаляют, а осадок переносят в сосуд объемом 1л и доставляют в лабораторию. Содержимое сосуда вновь отстаивают 1 - 2 ч, аосадок после удаления надосадочной жидкости переносят в центрифужные пробирки10 - 50 мл (в зависимости от объема осадка) и центрифугируют в течение 5 минпри 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют 3 мл1%-ного раствора хлористоводородной кислоты для растворения хлопьев коагулянта,перемешивают и центрифугируют в таком же режиме. Надосадочную жидкость удаляют,а осадок обрабатывают по нижеописанной методике.

Пробы, не прошедшиепредварительную обработку, могут храниться при температуре 15 - 20°С не болеедвух суток.

В случае если первичнаяобработка пробы воды (фильтрование) проводилась вне лаборатории, использованныефильтры помещают в широкогорлый флакон или стеклянную банку, добавляют 30 - 50мл исходной воды; закрывают флакон или банку завинчивающейся или притертойкрышкой, маркируют, указывают дату, место отбора, количество профильтрованнойводы и транспортируют в лабораторию для дальнейшего исследования. Приневозможности исследования в день отбора материал хранят при 4°С не болеесуток; при отсутствии необходимости определения жизнеспособности цист кишечныхпростейших и яиц гельминтов материал хранят при 4°С не более 3 - 4 суток последобавления в него формальдегида с таким расчетом, чтобы концентрация его всуспензии составила 2%.

 

5. Ход исследования

 

Перед началом фильтрациимембранные фильтры должны быть подвергнуты 10-минутному кипячению вдистиллированной воде для удаления посторонних частиц из пор фильтров,препятствующих оптимальному проведению процесса фильтрации.

Питьевая водаисследуется в объеме не менее 50 л, вода водоисточников - в объеме не менее 25л.

Исследуемый объем воды спомощью фильтровального устройства пропускают через мембранные фильтры (см.раздел "Оборудование и материалы"). По мере замедления процессафильтрации из-за загрязнения фильтра его заменяют новым, а использованные фильтрыс осадком помещают в широкогорлую емкость (стаканчики ВН) с помощью чистогопинцета (предварительно прокипяченного или обработанного спиртом) и заливаютисследуемой водой в количестве 30 - 50 мл для сохранения их во влажномсостоянии.

По окончании фильтрациивсей пробы осуществляется смыв осадка с фильтров. Каждый фильтр чистым пинцетомопускается в стаканчик с дистиллированной водой; придерживая пинцетом фильтр,осторожно смывают осадок при помощи чистой мягкой кисточки, затем фильтр ещераз прополаскивают в другой порции дистиллированной воды. При использованиифильтров с диаметром диска более 35 мм рекомендуется разрезать их чистыминожницами на несколько частей для удобства и более эффективной отмывки. Даннуюоперацию удобнее проводить в чашках Петри.

По окончании отмывкивсех фильтров кисточку также тщательно прополаскивают в небольшом объемедистиллированной воды (5 - 10 мл). Процедура отмывки фильтров и кисточкитребует особой тщательности во избежание возможных потерь цист простейших и яицгельминтов.

Весь полученный смывцентрифугируют в пробирках емкостью 10 мл или более в течение 5 мин при 1500об/мин (600g). Надосадочную жидкость сливают. При отсутствии необходимостиопределения жизнеспособных цист и яиц гельминтов осадок помещают в 6 - 8 мл2%-ного водного раствора формалина и размешивают.

Если предполагаетсяопределение жизнеспособности паразитарных патогенов, к осадку добавляют водудля отмывания его. Суспензии вновь центрифугируют в прежнем режиме, после чегоудаляют надосадочную жидкость, а к осадку добавляют 3 мл одного из флотантов итщательно перемешивают чистой стеклянной палочкой. Центрифугируют 5 мин при2000 об/мин, или 10 мин при 1500 об/мин, после чего надосадочную жидкостьпереносят пипеткой в центрифужную пробирку, разбавляют не менее чем в 4 разадистиллированной водой. Центрифугируют в прежнем режиме, удаляют надосадочнуюжидкость, а из осадка готовят препараты на предметных стеклах.

В зависимости от задачисследования препарат не окрашивают или подвергают окраске. Если нужно провеститолько подсчет паразитарных агентов без определения их жизнеспособности,препарат не окрашивается или его окрашивают 1 каплей 3%-ного раствора Люголя. Вероятнуюжизнеспособность цист лямблий можно определять, окрашивая препарат 1 каплей1%-ного водного эозина.

Готовые препаратынакрывают покровным стеклом и микроскопируют, сканируя всю площадь покровногостекла, с использованием 100 - 600-кратного увеличения (объективы - 10х, 40х,окуляры - 10х, 15х) сухой оптической системы. Для определения более тонкихвнутренних структур цист простейших, имеющих значение для их идентификации,используют масляно-иммерсионный 90 - 100-кратный объектив илифазово-контрастное микроскопирование. Таким образом микроскопируется весь объемполученного осадка. При необходимости проводят визуальную оценку вероятнойжизнеспособности цист лямблий и других простейших, а также яиц гельминтов.

Микроскопирование иидентификация паразитарных патогенов в пробах воды должны выполнятьсяспециалистом, умеющим отличать их от фитопланктона и яиц гидробионтов.

На обработку одной пробытребуется не менее 10 человеко-часов. Результат анализа может быть получен неранее чем на следующий рабочий день после доставки пробы.

 

6. Оценка результатовисследования

 

При микроскопированииподсчитывают число паразитарных патогенов во всем объеме осадка, чтосоответствует их числу во всей исследованной пробе. Одновременно определяютсистематическую принадлежность обнаруживаемых паразитических организмов;идентификация их проводится по следующим признакам.

Цисты лямблий - овальнаяформа, размеры 10 - 14 мк в длину и 6 - 10 мк в ширину; незрелые цисты содержат2 ядра, зрелые - 4; ядра находятся у переднего полюса цисты. Оболочка цистыотчетливо выражена и большей частью отстает от протоплазмы, что является однимиз характерных отличий цист лямблий от цист других простейших. Внутри цистывдоль по средней линии проходят две опорные нити - аксостили; в косом илипоперечном направлении лежат характерные парабазальные тела (2 - в незрелых и 4- в зрелых цистах), нередко заметен сложно свернутый жгутиковый аппарат.Плотность 1,06 - 1,09.

Цисты амебыдизентерийной - округлая, редко овальная форма, размеры от 10 до 16 мк; молодыецисты содержат 1 - 2 ядра с центрально расположенной звездчатой кариосомой,зрелые цисты содержат 4 ядра, в зрелых четырехъядерных и незрелых двухъядерныхцистах ядра расположены в различных плоскостях; оболочка цист двухконтурная ввиде светлого прозрачного ободка. Одноядерные цисты почти всегда содержат вбольшом количестве гликоген, который в виде крупной вакуоли с нерезкимиочертаниями занимает обычно больше половины цисты и раствором Люголяокрашивается в темно-коричневый цвет. Плотность 1,08 - 1,1.

Следует иметь в виду,что в природной воде могут встречаться цисты Entamoeba dispar, идентичныецистам дизентерийной амебы, но не обладающие патогенными свойствами длячеловека. В этом случае следует в протоколе исследования отмечать находки безуказания видовой принадлежности таких цист. Для идентификации их необходимыдополнительные специальные исследования. Однако и в данной ситуации должна бытьнастороженность в отношении эпидемического неблагополучия.

Цисты балантидиякишечного - правильная круглая форма, плотная двухконтурная оболочка, среднийразмер около 50 мк. Внутри цист имеется крупное бобовидное ядро. Протоплазмаоднородна, гликоген в ней распылен равномерно. Под оболочкой в некоторых цистахзаметно углубление, представляющее собой редуцированный цитостом - органеллу,соответствующую началу пищеварительной трубки многоклеточных. Ресничный покровотсутствует. Плотность 1,1.

Яйца аскаридычеловеческой (свиной) - оплодотворенные яйца овальной или шаровидной формы.Наружная оболочка крупнобугристая, толстая, коричневого цвета (иногдавстречаются яйца без наружной бугристой оболочки). Размеры яиц 50 - 70 х 40 -50 мк. Яйцеклетка мелкозернистая и шаровидная, расположена в центре яйца.Плотность 1,10 - 1,14.

Зрелое яйцо (способноезаразить при заглатывании) содержит внутри подвижную личинку, свернувшуюсякольцевидно или перекрестно.

Яйца токсокары (аскаридысобачьей) - почти круглые, 65 - 75 мк в диаметре, с нежноячеистой наружнойтолстой оболочкой темно-коричневого цвета, внутри яйца видна округлаязародышевая клетка. Зрелые инвазионные яйца содержат внутри подвижнуюсвернувшуюся кольцом или перекрестно личинку. Плотность 1,22.

Яйца власоглава -симметричные, имеют лимонообразную или бочонковидную форму. Оболочкатемно-коричневая, толстая. На обоих полюсах имеются светлоокращенныепробковидные образования. Размеры яиц 50 - 54 х 23 - 26 мк. В зрелыхинвазионных яйцах видна подвижная личинка. Плотность 1,16 - 1,22.

Яйца острицы -асимметричные. Одна сторона заметно уплощена, другая выпукла. Размеры яиц 50 -60 х 30 - 32 мк. Оболочка тонкая, гладкая и бесцветная. Яйца могут быть наразличных стадиях созревания, до головастикоподобной личинки включительно.Плотность 1,14.

Яйца цепня карликового -оболочка яйца бесцветная, тонкая, гладкая. Форма овальная. Размер яиц 40 х 50мк, эмбриофора (зародыш) почти шаровидная (29 х 30 мк), с длинными нитевиднымипридатками на полюсах. Плотность 1,12.

Онкосферы тениид (цепнясвиного и эхинококков) - овальная форма, размеры 31 - 40 х 2 - 30 мк; имеюттонкую наружную оболочку и толстую радиально-исчерченную внутреннюю оболочкутемно-коричневого цвета. Внутри онкосферы находится зародыш - эмбриофора сшестью зародышевыми крючьями. Плотность 1,24.

Отрицательный результатанализа не гарантирует отсутствия паразитарных патогенов в пробе, поэтомурезультат исследования должен представляться в протоколе термином "необнаружены". Обнаружение даже одного экземпляра паразитарных патогенов в 1пробе питьевой воды указывает на эпидемиологическое неблагополучие в системепитьевого водоснабжения.

 

7. Визуальная оценкавероятной жизнеспособности цист

патогенных простейшихкишечника и яиц гельминтов

 

Оценка вероятнойжизнеспособности цист патогенных простейших и яиц гельминтов визуальнопроводится по следующим критериям, подтверждающим жизнеспособность:

• целостность наружнойоболочки (отсутствие ее разрывов, вдавлений, выбухания, сморщивания);

• четкая внутренняяструктура цисты или яйца: у цист - четко видны ядра, отсутствует зернистость. Уцист лямблий, кроме того, видны аксостили, жгутиковый аппарат, медиальное тело.Для яиц гельминтов (аскарид, токсокар, власоглавов, остриц) характерно наличиедробящейся зародышевой клетки или подвижной личинки. У живых онкосфер тениид икарликового цепня зародышевые крючья расположены попарно, а у мертвых -беспорядочно;

• при окраске препарата1%-ным водным раствором эозина жизнеспособные цисты лямблий не воспринимаютокраску в течение первых 5 мин, мертвые окрашиваются сразу же в розовый цвет.Поэтому указанную окраску следует использовать до микроскопии только в том случае,когда на изучение препарата потребуется не более 5 мин. Часто просмотр мазкадлится 15 - 30 мин, тогда 1%-ный водный эозин можно вводить аккуратно, несдвигая препарат, под покровное стекло пипеткой в точке, где припредварительном просмотре уже обнаружены цисты лямблий;

• жизнеспособностьонкосфер тениид и яиц аскарид, содержащих личинку, определяют путем окрашиванияпрепарата смесью, содержащей метиленовый синий (см. п. 4.3.6). Живые онкосферытениид, а также личинки, находящиеся внутри яиц аскарид, не окрашиваются в течениепервых 15 мин. Мертвые окрашиваются сразу в синий цвет;

• жизнеспособностьонкосфер тениид можно также определить по движению зародышей при воздействии наних пищеварительными ферментами. Для этого исследуемый осадок, содержащийонкосферы, помещают на часовое стекло в искусственный дуоденальный сок (см. п.4.3.7). Стекло ставят в термостат при 36 - 38°С на 4 ч. Живые зародышиосвобождаются от оболочек, а мертвые - нет;

оболочки жизнеспособныхонкосфер растворяются также в подкисленном пепсине (рН 5 - 6) и в щелочномрастворе трипсина (рН 8 - 8,5) через 6 - 8 ч при температуре 38°С.

Схема выполненияметодики санитарно-паразитологического исследования воды и изображенияопределяемых с ее помощью цист кишечных простейших и яиц гельминтовпредставлены в приложениях 1, 2, 3.

 

 

Приложение 1

 

 

Схема методикисанитарно-паразитологического исследования воды

(последовательностьоперации)

 

Приложение 2

 

 

Цисты лямблий

 

 

Цисты амебыдизентерийной

 

 

Циста балантидиякишечного

 

 

Яйца аскаридычеловеческой (свиной),

слева - оплодотворенноеяйцо,

справа - инвазионное

 

 

Яйца власоглава

слева - свежевыделенное,

справа - инвазионное

 

 

Яйца аскариды собачьей(токсокары)

вверху - яйцо наначальной стадии развития,

внизу - инвазионное

 

Цисты патогенныхкишечных простейших и яйца гельминтов,

определяемые методикойсанитарно-паразитологического

исследования воды

Приложение 3

 

 

Яйцо острицы

 

 

Онкосфера тениид

 

 

Яйцо цепня карликового

 

Яйца гельминтов,определяемые методикой

санитарно-паразитологическогоисследования воды